極性改性反相色譜柱的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
由高壓液體泵分離系統、檢測器及液相色譜柱(含柱溫控制系統)等三部分組成。其中液相色譜柱的正確使用,是液相色譜工作的關鍵,也是采用液相色譜方法獲得準確實驗數據的必由之路。
極性改性反相色譜柱流動相的配制:
該色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長期留在柱中)。
流動相與樣品不產生化學反應。
流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
流動相沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。